本產品含有Calcein-AM和PI兩種組分。Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，其熒光呈綠色（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細胞內的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細胞內并發(fā)出強綠色熒光。由于死細胞缺乏酯酶，Calcein-AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標記。因此，Calcein-AM常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯(lián)合使用，同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過活細胞的細胞膜，僅能穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核，并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=615 nm），因此PI僅對死細胞染色。

本產品中Calcein-AM濃度為：1 mM，建議工作濃度1~10 μM；PI濃度為：1 mM，建議工作濃度1~10 μM；

使用方法（僅供參考）：

1.Calcein-AM/PI工作液配制：（推薦Calcein-AM: 2 μM, PI: 4 μM） 分別取10 μl的Calcein-AM和20 μl的PI儲存溶液，加入至5 ml的PBS中，充分混勻，備用； 【注意】：由于Calcein-AM的穩(wěn)定性比較差，此染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當天用完。 Calcein-AM和PI的最佳濃度是因不同的細胞種類而定，初次實驗建議做梯度實驗，以確定Calcein-AM和PI的最適濃度。
2.染色前先用PBS洗滌細胞兩次；
3.加入適量的Calcein-AM/PI工作液（貼壁細胞覆蓋即可），在培養(yǎng)箱中孵育15-30 min；
4.用PBS或適當的緩沖液洗滌細胞兩次；
5.熒光顯微鏡下觀察細胞染色結果, Calcein-AM檢測波長：Ex=490nm（藍光激發(fā)）, Em=515nm；PI檢測波長：Ex=535 nm（綠光激發(fā)）, Em=615 nm； 儲存條件 -20oC保存， 一年有效；
僅供科學研究使用 注意事項：
1.使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30 min。
2.由于Calcein-AM對濕度非常敏感，工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
3.第一次使用可對儲存液進行分裝，以減少反復凍融次數。
4.血清的存在可能會干擾Calcein-AM染色，染色前請先用PBS洗滌細胞。
5.碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚，需要立即用自來水清洗。
6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。